Тест IDEXX для ранней диагностики стельности

Название и назначение

IDEXX ELISA Milk Pregnancy тест для тестирования образцов молока коров – ИФА тест для определения маркеров (PAGs) в молоке коров - гликопротеинов ассоциированных со стельностью.
 

Общая информация

 
Ветеринары и фермеры используют раннее выявление не стельных (не покрытых) коров чтобы ускорить повторное осеменение и уменьшить интервал между отелами, таким образом, максимально увеличивая молочную продуктивность и доходность на ферме. Традиционно стельность определяется ректальной пальпацией коров или трансректальным ультразвуковым исследованием (TU). IDEXX ELISA Milk Pregnancy тест дает возможность лабораторным методом определить стельность начиная 35 дня после осеменения*, что дает ветеринарам и фермерам молочных ферм, важный инструмент в выявлении не стельных коров. Тест должен быть использован не раньше 60 дней после отела.
* Для получения характеристик по IDEXX Milk Pregnancy тесту обратитесь к валидационному отчету. 
 

Описание/Принципы

IDEXX ELISA Milk Pregnancy тест для исследования образцов молока коров – ИФА тест создан для определения маркеров (PAGs) в молоке коров - гликопротеинов ассоциированных со стельностью. Стенки лунок микротитровльных планшетов покрыты анти-PAG антителами. После инкубации исследуемых проб в покрытых лунках, связанные PAG обнаруживаются с помощью PAG-специфических антител (детектор- раствор) и конъюгата меченого пероксидазой хрена (HRPO конъюгат). Несвязанный конъюгат удаляется промывкой и в каждую лунку добавляется TMB субстрат. Цветовое окрашивание пропорционально количеству PAG в исследуемых пробах

 

Хранение

Храните реагенты при 2-8°C. Реагенты стабильны до окончания срока годности при условии хранения надлежащим образом.
Необходимые материалы, не входящие в набор
Меры предосторожности и предостережения для пользователей
• Ридер для чтения 96-луночных планшет оснащенный светофильтром на 450 нм и референс- фильтром (620 нм - 650 нм)
• Устройство для промывки планшетов (ручное, полуавтоматическое или автоматическое). IDEXX рекомендует использовать автоматический промыватель и предоставляет информацию о его специфических настройках при проведении данного теста на стельность.
• Шейкер/Инкубатор, способный поддерживать температуру +37°C (±2°C) и вращение 450 об/мин (±50 об/мин)
• Крышки для планшетов или клеевая пленка
• Используйте только дистиллированную или деионизированную воду для подготовки реагентов
• Точные одно- и многоканальные дозаторы
• Одноразовые наконечники
• Градуированный цилиндр для промывочного раствора 
 

Меры предосторожности и предостережения для пользователей

 
 

Компоненты теста на стельность для исследования молока
• Оптимальные результаты будут получены при строгом следовании с этой инструкции. Точность и правильность теста зависят от:
    • Использования клейких накрывающих крышек/пленок при внесении образцов, детектировании и инкубации конъюгата.
    • Аккуратности пипетирования, соблюдения временных интервалов и тщательности промывки в течение всей процедуры.
• Берегите ТМВ раствор от яркого света или других окислителей. Используйте для ТМВ раствора чистую стеклянную или пластиковую тару.
• Храните все компоненты при 2–8°C. Перед использованием доведите реагенты до температуры 18- 26°C и верните в температуру 2–8°C после использования.
• Необходимо быть аккуратным, чтобы предотвратить контаминацию компонентов набора.
• Не используйте компоненты после истечения срока годности и не смешивайте компоненты из наборов разных серий.
• Используйте только дистиллированную и деионизированную воду для подготовки реагентов, используемых в тесте.
• Не использованные стрипы должны храниться в запечатанном пластиковом пакете с влагопоглотителем при 2-8°C.
• Только для использования в ветеринарии.
 

Качество образцов и их подготовка

• Плохое качество образцов может поставить под угрозу достоверность результатов теста. Для поддержания качества образца могут быть использованы Бронопол или аналогичные консерванты. Перед проведением испытаний образцы молока должны быть проверены, чтобы убедиться, что они не испортились или расслоились и свободны от загрязнений.
• Следует проявлять осторожность, чтобы свести к минимуму вероятность переноса молока от коровы к корове во время отбора проб, особенно при использовании образцов, собранных для рутинной записи стада.  
• Для тестирования может использоваться консервированное, свежее, цельное или обезжиренное молоко. Также могут использоваться образцы, подвергшиеся нагреванию во время рутинного анализа компонентов молока. Образцы, которые подверглись микроволновой обработке (нагрев в микроволновой печи) к использованию не пригодны.
 

Лабораторная практика

• Не пипетируйте ртом.
• Нельзя есть, пить и курить во время работы с исследуемыми пробами и реагентами набора.
• Все отходы перед утилизацией должны быть обеззаражены. Утилизируйте содержимое согласно с местными, региональными и государственными правилами.
• Раствор субстрата может вызвать раздражение глаз, респираторной системы или кожи. Избегайте контакта с кожей и глазами.
 

Подготовка реагентов
Промывочный раствор

Концентрат промывочного раствора (10X) должен быть доведен до 18-26°C и перемешан для гарантированного растворения выпавших кристаллов соли. Промывочный концентрат (10X) должен быть разведен в 10 раз (1/10) дистиллированной/деионизированной водой перед использованием (например, 30 мл концентрата плюс 270 мл воды на один планшет). Промывочный раствор, при приготовлении его в стерильных условиях, можно хранить в течение 1 недели при 2-8°C.
 

Метод постановки

Все реагенты перед использованием должны быть доведены до комнатной температуры (18-26°C). Реагенты должны быть перемешаны легким вращением. Используйте отдельные наконечники для каждой исследуемой пробы.
1. Подготовьте планшеты из набора и запишите местоположение исследуемых проб на листе.
2. Используйте столько стрипов с микролунками, сколько необходимо для проведения исследования; неиспользуемые стрипы поместите в воздухонепроницаемый пакет с влагопоглотителями и уберите в холодильник при 2-8°C.
3. Внесите по 150 мкл Отрицательного контроля в две лунки планшета.
4. Внесите по 150 мкл Положительного контроля в две лунки планшета.
5. Внесите по 150 мкл Образцов в соответствующие лунки.
6. Накройте лунки и инкубируйте 120 минут (±5 минут) при 37°C (±2°C) с вращением платформы при 450 об/мин (±50 об/мин). Планшет должен быть плотно закрыт клейкой пленкой во избежание испарения.
7. Удалите жидкое содержимое лунок в резервуар, предназначенный для отходов, и промойте каждую лунку 4 раза промывочным раствором в количестве примерно 300 мкл. Удаляйте жидкость из всех лунок после каждой промывки. В конце процедуры, для удаления остатков жидкости слегка постучите планшетом об абсорбирующий материал. Избегайте высыхания лунок между промывками и внесением следующего реагента.
8. Внесите по 100 µl детектор-раствора в каждую лунку.
9. Накройте лунки и инкубируйте 30 минут (±2 минуты) при комнатной температуре (18-26°C). Планшет должен быть плотно закрыт клейкой пленкой во избежание испарения.
10. Повторите шаги 7.
11. Внесите по 100 мкл Конъюгата в каждую лунку.
12. Накройте лунки и инкубируйте 30 минут (± 2 минуты) при 18-26°. Планшет должен быть плотно закрыт клейкой пленкой во избежание испарения.
13. Повторите шаги 7.
14. Внесите по 100 мкл ТМВ Субстрата №.12 в каждую лунку.
15. Инкубируйте 20 минут (±1 минута) при 18-26°.
16. Внесите по 100 мкл стоп-раствора №. 3 в каждую лунку для остановки реакции. Вносите стоп-раствор в той же последовательности, в которой вносили субстрат в пункте 14.
17. Измерьте и запишите результаты для исследуемых проб и контролей при A(450 нм)-A(REF). Длина волны референс-фильтра должна быть A(620 нм-650 нм).
18. Произведите расчет результатов.

Результаты 

Исследования считаются достоверными, если соблюдены следующие технические условия. Среднее значение Положительного контроля (PCx) минус среднее значение Отрицательного контроля (NCx) должно быть больше или равно 0.500. Кроме того, среднее значение Отрицательного контроля должно быть меньше или равно 0.200. При недостоверных результатах, можно подозревать неправильную методику выполнения, и исследования необходимо повторить, тщательно изучив инструкцию, вложенную в набор. Статус стельности или не стельности определяется сравнением OD значением (S-N) для каждой пробы. См. в разделе "Расчеты" строку примеров.

ПРИМЕЧАНИЕ: IDEXX предоставляет инструменты и программное обеспечение для вычисления среднего и S-N значений и предоставления итогового отчета. 

 

Интерпретация результатов

Статус о стельности животного устанавливается расчетом S-N соотношения для каждой исследуемой пробы.
    1. Если S-N значение меньше, чем 0.100, животное считается не стельным.
    2. Если S-N значение меньше чем 0.250 но больше или эквивалентно 0.100, то животное должно быть исследовано повторно на подтверждение статуса стельности.
    3. Если S-N значение равно или больше чем 0.250, животное считается стельным.
    IDEXX рекомендует производителям работать в тесном контакте с ветеринарными специалистами, чтобы разрабатывать программы управления репродуктивностью, соответствующих рабочим процессам.
 

Сводная таблица проведения исследования

   IDEXX настоятельно рекомендует прочитать инструкцию полностью при использовании набора в первый раз


 

Описание символов